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壁細胞中ATP含量測定的一些問(wèn)題？

發(fā)布時(shí)間：2014/2/10 15:37:14　瀏覽次數：4164　[字號：大 中 小]　 [關(guān)閉此頁(yè)　打印此頁(yè)]

想要測定貼壁細胞中ATP含量。想和您請教一些問(wèn)題：

1、說(shuō)明書(shū)中”先離心處理將細胞核培養上清分離“，意思是用胰酶將細胞從貼壁變成懸浮，在離心與培養上清分離嗎？但是胰酶會(huì )不會(huì )對細胞有影響呢？有更好的辦法嗎？

2、說(shuō)明書(shū)上說(shuō)，將細胞置于熱水浴90-100中勻漿破碎，請問(wèn)勻漿破碎具體怎么操作呢？

3、混勻抽提后，待測樣品應置于哪里？冰上還是室溫？

4、一般熱水浴和沸水浴如何做到的，目前實(shí)驗室里沒(méi)有加熱到這么高溫度的恒溫水浴鍋，不知道有沒(méi)有其他辦法？

5、是經(jīng)過(guò)說(shuō)明書(shū)上的樣品前處理，之后再進(jìn)行蛋白濃度的測定嗎？gprot/L這個(gè)蛋白濃度的單位是怎么定義的？

回復：1、一般的處理方法是用胰酶消化，再離心分離，再用生理鹽水洗2-3次，離心留沉淀。

      2、可以用超聲細胞破碎儀或者玻璃勻漿管旋轉碾磨破碎。

      3、室溫

      4、把水煮開(kāi)用就好

      5、對。gprot/L表示克蛋白/L，即1L樣本中有蛋白多少g

 

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