成骨誘導測定ALP問(wèn)題?
發(fā)布時(shí)間:2014/2/8 10:20:15 瀏覽次數:4203 [字號:大 中 小] [關(guān)閉此頁(yè) 打印此頁(yè)]
我想咨詢(xún)幾個(gè)問(wèn)題:
(1)我做成骨誘導測ALP活性,應該是測培養基上清的ALP還是細胞內的ALP?
(2)測細胞內ALP的話(huà)如何裂解細胞提蛋白?
(3)是否需要測上清或細胞內總蛋白濃度進(jìn)行標準化?
回復:
從我們這邊接觸的樣本測定來(lái)說(shuō),測定細胞中ALP活力相對比培養液中的要好一些;比較細胞代謝方面優(yōu)于培養液,只有當細胞破碎或者透性增大,才會(huì )釋放到培養液中。
細胞樣本需要進(jìn)行破碎處理,推薦方法物理破碎,如勻漿、超聲等;化學(xué)裂解法建議選擇相對溫和的裂解液;成分不宜過(guò)于復雜,防止成分的干擾。
測定細胞中ALP需要盡心蛋白定量;如果是培養液,則不需要進(jìn)行蛋白定量。
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