細胞做AKP怎么處理？
發(fā)布時(shí)間：2014/2/8 9:25:33 瀏覽次數：3692 [字號：大 中 小] [關(guān)閉此頁(yè) 打印此頁(yè)]
購買(mǎi)了貴單位的AKP活性檢測試劑盒，貨號是JC-A0059.
我打算檢測96孔板貼壁細胞中不同藥物處理后AKP活性的變化，看了一下說(shuō)明書(shū)，有些地方不明白：
1.細胞裂解液用的是什么：說(shuō)明書(shū)舉例用的是“0.2毫升的1%Trition加入12孔板",但不知道要處理細胞多長(cháng)時(shí)間呢？96孔板大概需要加多少呢？
2.舉例中提到要用BCA法測定蛋白濃度，我不太清楚，做貼壁細胞AKP活性檢測都需要檢測蛋白濃度嗎？
這里的蛋白濃度是用Triton裂解細胞后獲得的蛋白裂解液檢測的嗎？是否每個(gè)孔都需要檢測蛋白？
懇請盡快解答，謝謝??！我的聯(lián)系電話(huà)是13798040097 杜宇
回復：
1、用TritonX-100裂解細胞，測定AKP活性，我們建議4℃裂解，但是一般所需時(shí)間會(huì )比較長(cháng)，至少需要2小時(shí)左右，但很多老師提到時(shí)間不夠，需要4℃裂解過(guò)夜?。P(guān)于細胞破碎的程度，最好用顯微鏡觀(guān)察確定）
96孔板容量較少，裂解液只需要覆蓋滿(mǎn)細胞就可以了，所以96孔板加30-50微升就可以了！
2、測定細胞的AKP活性，需要破碎細胞，考慮到每一孔的細胞量的差異，所以破碎細胞后我們都會(huì )同時(shí)檢測其中的總蛋白濃度！用于結果計算并校正細胞數量的差異！也就是用TritonX-100裂解細胞后一部分用于AKP的測定；一部分用于總蛋白的定量！
當然也有老師不考慮細胞量的問(wèn)題，直接按孔來(lái)表示并比較結果，不測定蛋白！
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