貼壁細胞樣品如何制備的問(wèn)題
發(fā)布時(shí)間：2014/2/8 9:02:19 瀏覽次數：3306 [字號：大 中 小] [關(guān)閉此頁(yè) 打印此頁(yè)]
因為在你們這里HK,G6PD,LDH,GSH,PK的酶活性檢測試劑盒，想了解一下關(guān)于貼壁細胞樣品如何制備的問(wèn)題，和我們這里只有1.0cm光徑的比色皿，用1.0和0.5的區別在哪里。下面是我的蛋白樣品制備的方法，看是不是需要改進(jìn)，謝謝。
回復:
體外培養細胞用超聲裂解后用于相關(guān)酶活性檢測，是可以的！從您需要檢測的指標中，HK、PK、LDH、GSH測定細胞內我們都做過(guò)，沒(méi)有問(wèn)題。
操作流程：貼壁培養的細胞，去掉培養液后，PBS洗1-2次，胰酶消化，終止后用移液器輕輕吸打，然后轉入EP管，低速離心棄上清，再用PBS洗一次細胞，離心棄上清留沉淀細胞，如果暫時(shí)不做，將沉淀細胞低溫凍存！
測定之前，根據指標，加入一定量的緩沖液（PBS或者生理鹽水），將細胞懸浮，超聲破碎，破碎后不需離心，直接混勻充分后用于不同指標的測定。但是細胞一旦破碎，相關(guān)指標盡快完成，不可存放！
HK、PK我們是用0.5cm光徑石英比色皿進(jìn)行測定的，由于我們的反應體系只有1ml多一點(diǎn)，普通1cm光徑的比色皿不夠比色！
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